二级生物安全柜是能防止实验操作处理过程中某些含有危险性或未知性生物微粒发生气溶胶散逸的箱型空气净化负压安全装置。其广泛应用于微生物学、生物医学、基因工程、生物制品等领域的科研、教学、临床检验和生产中，是实验室生物安全中一级防护屏障中基本的安全防护设备。也是药企微生物实验室基本的设备之一。
1、二级生物安全柜在操作前应将本次操作所需的全部物品移入安全柜，防止双臂频频穿过气幕损坏气流；并且在移入前用70%酒精擦洗外表消毒，以去除污染。
2、翻开风机5～10分钟，待柜内空气净化并气流安稳后再进行试验操作。将双臂慢慢伸入安全柜内，少停止1分钟，使柜内气流安稳后再进行操作。
3、安全柜内不放与本次试验无关的物品。柜内物品摆放应做到清洁区、半污染区与污染区基本分开，操作过程中物品取用便利，且三区之间无穿插。物品应尽量靠后放置，但不得挡住气道口，防止搅扰气流正常活动。
4、操作时应按照从清洁区到污染区进行，以防止穿插污染。为防可能溅起的液滴，可在台面上铺用消毒剂浸泡过的毛巾或纱布，但不能覆盖住安全柜格栅。
5、柜内操作期间，禁止运用酒精灯等明火，以防止发生的热量发生气流，搅扰柜内气流安稳；且明火可能损坏HEPA滤器。
6、作业时尽量削减背面人员走动以及快速开关房门，以防止安全柜内气流不安稳。
7、在试验操作时，不可翻开玻璃视窗，应确保操作者脸部在作业窗口之上。在二级生物安全柜柜内操作时动作应轻柔、舒缓，防止影响柜内气流。
8、安全柜应定时进行检测与保养，以确保其正常作业。作业中旦发现安全柜作业反常，应立即停止作业，采取相应处理办法，并告诉相关人员。
9、作业*后，封闭玻璃窗，坚持风机继续运转10～15分钟，起翻开紫外灯，照耀30分钟。
10、安全柜应定时进行清洁消毒，柜内台面污染物可在作业完结且紫外灯消毒后用2%的84消毒液擦洗。柜体外外表则应每天用1%的84消毒液擦洗。
11、二级生物安全柜柜内运用的物品应在消毒后再取出，以防止将病原微生物带出而污染环境。
