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多个研究领域依赖于稀有细胞的分离，例如从人血中分离循环肿瘤细胞 ( CTCs )、从母体样本中分离胎儿细胞，或在分离低丰度的GFP阳性转染细胞。在这些情况下，传统流式细胞分选仪的高系统压力 ( >20psi ) 会对损害目标细胞的完整性和活性。高死体积会造成样本损失，稀有细胞的数量本身就非常有限，这无疑是雪上加霜。此外，高度专业化的设备和技术人员，增加了操作的成本和复杂性。
单细胞柔性分选系统Pala基于微流控技术，流式细胞术和液滴分配技术。可在几分钟内将单个细胞分选并分离到96或384孔板中。低系统压力 (<2psi ) 可确保轻柔分选，并保持细胞活力和完整性。为单细胞分选和分离提供了快速、简单的解决方案。
01. 实验步骤
> 稀有细胞富集
将HEK-293细胞以0.002%的比例混入到无荧光SP2/0细胞中 ( 2.8μL HEK-293细胞加入到500uL SP2/0中) 制备模拟稀有细胞群。在此细胞群中，预计有10个FITC信号值大于100的HEK-293细胞。进行富集时，利用FITC通道作为触发器，触发值为100。其它设门参数参照各组的分析数据。
96孔板A1孔预先加入150μL培养基进行富集细胞收集。在富集过程中，将1μL的一滴液滴到载玻片上，在显微镜下检测阳性细胞的比例，发现一滴中总共含有10个细胞，其中一个呈GFP阳性。将富集后A1孔中样品 ( 少于200μL ) 转移至新芯片中，用100μL培养基清洗两遍A1孔，并将清洗液同样转移至新芯片中。
> 对富集后稀有细胞分离
利用单细胞分选模式分选单个荧光细胞，将前向散射光 ( FSC ) 通道作为激发器，激发水平为FSC50。为排除芯片之间的微小差别，将FITC下限设为90而不是之前的100，其它设门数据参照之前的设置。单个GFP阳性细胞分布到预加150μL培养基的96孔板中。单个细胞利用显微镜进行验证，克隆培养14天。
02. 实验结果
（1）模拟稀有细胞样本包含500,000个SP2/0细胞和仅有10个GFP阳性HEK-293细胞 ( 0.002% ）。富集后，目标群体在分离池中的频率为10%，增加了5000倍。
（2）通过明场和荧光显微镜检查，确认从富集中恢复了7个GFP阳性HEK-293细胞，富集效率为70%。
（3）在单细胞分离后，96孔板中识别出7个中的4个GFP阳性HEK-293细胞，单细胞分离效率为40%。14天的单细胞扩增确认了GFP阳性细胞的克隆增殖。
03. 单细胞柔性分选系统Pala的优势
（1）温和的操作条件：在低压环境下操作 (＜2psi )，这有助于保护细胞的完整性和活性，避免因高压造成的细胞损伤。
（2）灵活的分离模式：单细胞分离模式，富集分离模式，大量细胞分离模式，满足不同应用需求。
（3）高效的分离速度：仅需1min即可完成将单细胞分离至96孔板中，6min可实现分离至384孔板。
（4）极低的死体积：近乎零的死体积，这有助于最大限度地减少样本损失，特别是在处理稀有或珍贵的细胞样本。
（5）适用于小样本量：即使从很少的细胞开始 ( 如100个细胞 )，单细胞分配器也能够进行有效的分离和分配。
总之，单细胞柔性分选系统Pala的两步法实现稀有细胞分离，为传统细胞分选仪器提供了一种经济高效的替代方案，这种低压系统保留了分离细胞的完整性和活性，利于分离的克隆细胞健壮生长。
* 本文转载自「ProteinSimple」微信公众号
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